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酶联免疫(ELISA)实验操作流程
2015-10-15

1.溶液和试剂

110 X PBS: 80g NaCl2g KCl, 14.4g Na2HPO4 2.4g KH2PO4 1 L纯水,调pH至 7.4
2)包被液:1X PBS 
3)洗涤液:含0.05% Tween-20 1X PBS1X PBST)或纯水
4)封闭液:10 mg/ml BSA(1% BSA1X PBS配置)
5)抗体稀释液:一抗、二抗均用1%BSA-PBS
62M H2SO4终止显色: 108ml 98%H2SO4,加纯水稀释到1L 

2.实验步骤

1

抗原准备:将抗原按适当浓度溶解于包被液中; 

2

包被:在对应的孔中加入100μl抗原,37℃孵育2小时或4℃过夜;

3

洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗5次;  

4

封闭:每孔加200μl封闭液,37℃孵育1小时;  

5

洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗3次; 

6

一抗:每孔加100μl一抗,37℃孵育2小时; 

7

洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗7次; 

8

二抗:每孔加100μl二抗,37℃孵育1小时; 

9

洗涤:倒空液体并拍干残留液体,洗涤液冲洗7次; 

10

显色:拍干孔中残留液体,每孔加100μl TMB显色液,37℃避光显色10min;

11

检测:每孔加50μl 2M H2SO4终止显色,并立即读取450nm OD值。 



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