None
上海俊喆生物技术公司全体员工,欢迎各位新老客户咨询相关业务,期待与您合作共赢,我们将竭诚为您服务!
联系我们
  • 电话: 021-61659618
  • 手机: 13818676837
  • QQ: 点击这里给我发消息
  • mail: sh@jzbio.net
  • 地址: 上海市报春路388弄
  • web: www.jzbio.net

专业资源

当前位置:首页 > 免疫组织化学(IHC)实验操作流程

1.试剂和溶液

乙醇: 无水乙醇,95%乙醇,85%乙醇,70%乙醇
抗原修复液: 0.01M的柠檬酸钠缓冲液:58.82g柠檬酸三钠及7.56g柠檬酸溶于200ml纯水,调pH至 6.0,纯水1:100稀释为工作液
3%过氧化氢-甲醇30%的过氧化氢与无水甲醇1:9稀释
10X PBS: 80g NaCl2g KCl, 14.4g Na2HPO4 2.4g KH2PO4 1 L纯水,调pH至 7.4
洗涤液: 1×PBS:纯水稀释10× PBS1× PBST:含0.05% Tween-20 1×PBS1×PBSTsuper block,生物素标记的UltraTek Anti-Polyvalent二抗,酶标亲和素UltraTek HRPDAB
显色试剂盒:Cat. KT1002a
抗体稀释液:3%BSA-PBS
0.5%盐酸-乙醇:0.51%盐酸,95.095.5%乙醇
苏木素:苏木精2g溶于250ml无水乙醇,十六水合硫酸铝17.6g 溶与750ml纯水,以上溶液充分混合,加入碘酸钠 0.2g和冰醋酸20ml 

2.实验步骤

1

组织固定:烘箱温度65-75℃ 30min或者65℃过夜;

2

脱蜡:二甲苯浸泡三次,每次10分钟;

3

水化:依次经过无水乙醇,95%乙醇,85%乙醇,70%乙醇浸泡,每次5min;

4

洗涤:自来水冲洗1次,PBS浸泡3min;

5

抗原修复:放入稀释100倍的柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0) 中,高压锅煮沸10min,常温冷却30min;

6

洗涤:纯水浸泡2次,PBS浸泡1次,每次3min;

7

灭活酶:室温下3%过氧化氢-甲醇暗处处理切片15min;

8

洗涤:纯水浸泡1次,PBS浸泡2次,每次3min;

9

封闭:加入适当体积的super block(KT1002a Reagent A),37℃温箱孵育5min;

10

洗涤:纯水浸泡1次,PBS浸泡2次,每次3min;

11

一抗:加入反应体积为0.15ml,适合浓度的一抗, 37℃ 湿盒孵育60min。

12

洗涤:PBST浸泡3次,PBS浸泡1次,每次3min;

13

加入适当体积生物素标记的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗(KT1002a Reagent B),37℃湿盒孵育10min;

14

洗涤:PBST浸泡3次,PBS浸泡1次,每次3min;

15

加入适当体积酶标亲和素UltraTek HRP(KT1002a Reagent C), 37℃湿盒孵育10min;

16

洗涤:PBST浸泡3次,PBS浸泡1次,每次3min;

17

显色:滴加适量DAB显色液(KT1003a)至切片上,室温显色1~5min,自来水冲洗;

18

复染:苏木素染色5min,蒸馏水冲洗5min;

19

分化: 0.5%盐酸乙醇混合液中分化,自来水冲洗3-4次, PBS中浸泡10-20秒返蓝,自来水冲洗2次。

20

脱水:经过70%乙醇,85%乙醇,95%乙醇,无水乙醇浸泡,每次5min;

21

透明:二甲苯浸泡2次,每次10-15min;

22

封片:晾干后加中性树胶,盖玻片封片;

23

结果:显微镜观察,记录结果。



  • 电话咨询
  • 13818676837
  • 021-61659618
None