1.溶液和试剂
1）10 X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L纯水，调pH至 7.4
2）包被液：1X PBS
3）洗涤液：含0.05% Tween-20 的1X PBS（1X PBST）或纯水
4）封闭液：10 mg/ml BSA(1% BSA，1X PBS配置)
5）抗体稀释液：一抗、二抗均用1%BSA-PBS
6）2M H2SO4终止显色： 108ml 98%H2SO4，加纯水稀释到1L
2.实验步骤
1 | 抗原准备：将抗原按适当浓度溶解于包被液中； |
2 | 包被：在对应的孔中加入100μl抗原，37℃孵育2小时或4℃过夜； |
3 | 洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗5次； |
4 | 封闭：每孔加200μl封闭液，37℃孵育1小时； |
5 | 洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗3次； |
6 | 一抗：每孔加100μl一抗，37℃孵育2小时； |
7 | 洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗7次； |
8 | 二抗：每孔加100μl二抗，37℃孵育1小时； |
9 | 洗涤：倒空液体并拍干残留液体，洗涤液冲洗7次； |
10 | 显色：拍干孔中残留液体，每孔加100μl TMB显色液，37℃避光显色10min； |
11 | 检测：每孔加50μl 2M H2SO4终止显色，并立即读取450nm OD值。
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